Banyak fokus telah diberikan pada manfaat2 kesehatan dari makanan2 dan minuman2 yang mengandung senyawa2 antioksidan. Berdasarkan mereaksikannya dengan pembentuk-radikal bebas sebelum mereka dapat menyebabkan kerusakan sel, antioksidan2 melindungi tubuh terhadap stres oksidatif. ¹ Beberapa makanan dan minuman secara alami mengandung antioksidan2, tetapi suplementasi bahan makanan telah semakin meningkat akibat tuntutan konsumen2 yang sadar kesehatan. Baru-baru ini, teh hijau telah berhasil dipromosikan sebagai minuman kesehatan karena mengandung senyawa2 fenolik antioksidan.
Menggunakan LC/TOFMS, kita memperlihatkan sebuah metode langsung untuk menentukan keberadaan senyawa2 antioksidan dalam formulasi2 teh komersial. Sampel2 disiapkan dengan menambahkan sekitar 15g produk teh kering ke 200ml metanol yang didinginkan sampai sekitar 20 ° C. Campuran diaduk selama 5 menit dan didekantasi. Produk teh ini dibilas dengan 20ml tambahan metanol yang telah didinginkan. Solusi 200ml dan 20ml digabungkan, kemudian disaring melalui alat suntik penyaring (filter syringe) 0.45μm untuk menangkap partikel2. Larutan yang telah disaring ini digunakan secara langsung untuk analisis.
Kita menggunakan sebuah kolom HPLC Ultra Aqueous C18 150 x 2.1 mm untuk analisis dan, karena ekstrak teh adalah matriks yang kompleks, kami menggunakan sebuah elusi gradien dan fase2 gerak dengan kandungan air yang tinggi. Fase stasioner Ultra Aqueous C18 ini sangat ideal untuk aplikasi seperti itu: fase secara khusus dirancang untuk mencegah runtuhnya rantai2 alkil C18 dalam fase2 yang bergerak yang sangat berair ².
Fase Ultra Aqueous C18 terbukti ideal untuk memecahkan matrik teh yang komplek, seperti yang ditunjukkan oleh sejumlah besar puncak2 pada Gambar 1. Kekuatan pemecahan sistem kromatografi ini, dikombinasikan dengan Spektrometer Massa TOF LECO Unique ®, memungkinkan analis untuk ekstrak data senyawa2 tertentu yang diinginkan dan secara manual memeriksa spektra untuk senyawa2 lain, termasuk glikosida2 fenolik dan ester2 dari asam fenolat.
Jika Anda menganalisis antioksidan2 dalam teh, atau senyawa2 campuran komplek lainnya, kolom C18 Ultra Aqueous memberikan Anda hasil yang dapat diandalkan yang Anda butuhkan, tanpa membatasi kemampuan Anda untuk menggunakan komposisi fase gerak yang terbaik untuk aplikasi Anda.
Tabel I Senyawa2 fenolik yang diinginkan.
Senyawa
[M-H]-
gallocatechin-3-gallate
catechin
epigallocatechin-3-methyl gallate
epicatechin di-gallate
epicatechin-3-gallate
catechin gallate
457.206
289.154
471.208
609.318
4 41.208
Nota: m/z 441.2 dapat berupa epicatechin-3-gallate atau catechin gallate.

Gambar 1 Sebuah campuran komplek dari komponen2 ekstrak teh yang dipisahkan terbaik dengan sebuah kolom C18 Ultra Aqueous dengan fase gerak yang sangat berair (total kromatogram2 ion dari senyawa2 Tabel 1).




LC_FF0425

Untuk kondisi2 lihat Gambar 3.
Gambar 2 (-)-Epicatechin dihasilkan oleh infusi dengan sebuah standar (A) dan spektrum (-)-epikatekin dibuat dari sebuah kromatogram ion yang terekstraksi (B).



LC_FF0425A & LC_FF0425B
Untuk kondisi2 lihat Gambar 3.

Gambar 3 Spektrum dari senyawa2 fenolik teridentifikasi dalam ekstrak teh.
A) Glikosida quercitin dicoumaryl



LC_FF0425G

B) epigallocatechin 3-methyl gallate



LC_FF0425F

C) ester asam caffeic



LC_FF0425E



D) gallocatechin-3-gallate



LC_FF0425C





E) catechin



LC_FF0425D


Sampel:

Injeksi:
10µL
Konsentrasi:
15g teh diekstraksi dengan/ 200mL + 20mL metanol
Pengencer sampel:
metanol
Kolom:
Ultra Aqueous C18
Cat.#:
9178562
Dimensi:
150 x 2.1 mm
Ukuran partikel:
5µm
Ukuran pori:
100Å
Kondisi2:

Fase Bergerak:
A: 0.15% asam format dalam air;

B: 0.15% asam format dalam asetonitril (v/v)

Waktu ( menit)
%B

0
60
5
9.5
Aliran:
0.3mL/menit
Suhu:
ambien
Detektor:
Leco Unique® LC-TOFMS

Voltase ESI:
-3500 V

suhu desolvasi:
300°C

Tekanan nebulisasi:

375 kPa

Gas desolvasi:

7000 cc/min.

Suhu interfaz:


100°C

Nosel:


-80 V

Akuisisi data:


3.13 spectra/detik.
Untuk informasi tentang LECO Unique ® TOFMS, silakan kunjungi situs web LECO: www.leco.com
Referensi
1. Kerusakan radikal bebas diimplementasikan dalam banyak model penyakit, termasuk kanker, di banyak penyakit degeneratif, dan pada proses penuaan.
2. Ketika, rantai alkil hidrofobik panjang dari fase diam C18 konvensional terkena fase gerak yang sangat berair menekuk ke bawah pada dirinya sendiri, menyebabkan hilangnya retensi. Sebuah waktu ekuilibrasi yang berkepanjangan dalam larutan organik yang tinggi diperlukan untuk memulihkan fase. Fase diam Ultra Aqueous C18 tidak rentan terhadap runtuhnya fase - bahkan tidak dalam fase bergerak dengan kandungan air yang sangat tinggi.